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先用清水洗干净,然后用胰酶消化1小时,最后用75%的酒精浸泡过夜,使用前,在紫外灯下面照射1小时即可。Transwell小室这项技术的主要材料是Transwell小室(Transwell chamber,Transwell insert
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先用清水洗干净,然后用胰酶消化1小时,最后用75%的酒精浸泡过夜,使用前,在紫外灯下面照射1小时即可。Transwell小室这项技术的主要材料是Transwell小室(Transwell chamber,Transwell insert
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:① Transwell小室:多种厂家可提供,论坛里常用的是Costar、Corning、BD生产的小室,我们实验室用的是Chemicon公司的ECM550系列,另有Boyden chamber、Millipore公司的millicell和雕弓满月
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最好是24小时。实验前将保存在-20℃的基质胶转移至4℃冰箱融化过夜,使用前用无血清培养基按培养基:基质胶=2:1的比例稀释;接种前将24孔板和Transwell小室用1×PBS浸泡5min湿润小室。用胰蛋白酶消化细胞后,用无血清培养液
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ECM由BM和细胞间质组成,为肿瘤转移的重要组织屏障。肿瘤细胞通过其表面受体与ECM中的各种成分粘附后激活或分泌蛋白降解酶类来降解基质,从而形成局部溶解区,构成了肿瘤细胞转移运行通道。一般恶性程度高的肿瘤细胞具有较强的蛋白水解作用,可
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24孔板下室一般加入600μl含20S的培养基。取细胞悬液100μl加入Transwell小室。特别注意的是,下层培养液和小室间常会有气泡产生,一旦产生气泡,下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了,在种板的时候要特别留心,一旦出现气泡,要将
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Transwell法的步骤:先把小室擦干净后在超净工作台照紫外过夜。如新的小室省略此步。下一步将小室倒扣并小室的底部外侧滴加0.1%(还是1%记不清了)的明胶室温放置20-30分钟。这是将细胞消化下来,调浓度。拿出24孔板加600ml的
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。2.1.2 有基质胶的Transwell小室制备Chemicon公司的ECM550系列说明书要求,将小室放入培养板中,在上室加入300µl预温的无血清培养基,室温下静置15-30min,使基质胶再水化。再吸去剩余培养液。2.2 制备细胞悬液① 制备
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12ml。一般12孔细胞培养板每一个孔加入1ml培养基。transwell实验原理简单地说就是用一层膜将高营养的培养液和低营养的培养液隔开,细胞放在低营养的培养液里,为了找吃的,细胞会往高营养的培养液里面跑,但是有膜挡着,所以要穿过膜才行
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polycarbonate membrane insert, Qty 48,950人民币不到。平均每个20元不到。Transwell小室按照公司的要求,都是一次性使用的。不过其实洗洗泡泡还是可以重复用的。我用的Chemicon公司的ECM554,用完后擦去基质胶